组织流式细胞术快速鉴定抗原助力复发难治 B 细胞恶性肿瘤 CAR-T 治疗靶点选择

2020 年新冠疫情全球肆虐，但疫情并未阻挡血液界对学术研究、临床实践的不断探索与交流。2020 年 12 月 5-8 日，第 62 届美国血液学会年会（ASH 2020）首次以线上形式召开。作为全球血液学领域最大最权威的国际学术盛会之一，ASH 每年都会吸引来自全球 100 多个国家的近三万名血液学专家、学者和其他相关医疗保健专业人士参会，会议期间将有超过数千多份摘要呈现。

近年来，嵌合抗原受体（CAR）T 细胞疗法已广泛用于治疗复发/难治 B 细胞恶性肿瘤。

在 CAR-T 细胞治疗之前为了选择合适的抗原特异性 CAR，需要明确肿瘤细胞上的靶抗原，通常是对骨髓（BM）标本进行多参数流式细胞（FCM）检测或对组织标本进行免疫组化（IHC）染色，FCM 检测快速而准确而免疫组化染色耗时较长。一些 B 细胞恶性肿瘤患者仅具有肿块而没有 BM 浸润或浆膜腔积液（SCE），无法采用常规流式检测方法，而难治/复发患者肿瘤细胞生长迅速，急需尽快获知 CAR-T 治疗靶点及尽早治疗。

本次 ASH 大会上，高博医学诊断中心流式细胞实验室喻新建主任报告了团队建立组织标本 FCM 快速鉴定抗原法，为患者随后的 CAR-T 治疗赢得更多的宝贵时间。 

研究共纳入 63 例复发/难治 B 细胞恶性肿瘤患者，均为多线治疗失败后来我院中心接受 CAR-T 治疗者，包括 11 例急性淋巴细胞白血病（ALL）和 52 例非霍奇金淋巴瘤（NHL），中位年龄 41 岁（范围 1-71 岁）。标准抗体 panels 由前体 B 细胞的 CD10 / CD20 / CD34 / CD19 / CD38 / CD45 和成熟 B 细胞的 kappa / lambda / CD10 / CD19 / CD20 / CD38 / CD45 组成，可以根据患者的情况添加其他抗体。组织标本通过适当处理制成细胞悬液。

流式获取的细胞从每管 1000 个到每管 100,000 个不等（5 例<5,000 和 17 例>100,000），可用于分析的肿瘤细胞占所有细胞的百分比为 0.03%~99.44%（5 例<5% 和 13 例>90%）。我们有针对 B-ALL 和 B-NHL 的 CD19-，CD20-和 CD22 特异性 CAR-T 细胞，选择何种 CAR-T 取决于肿瘤细胞的抗原表达，某些抗原部分表达或不表达或低表达的患者（PND 表达）不适合进行相关抗原特异性 CAR-T 治疗。

该组患者中除 1 例接受 CD19 CAR-T 治疗的 ALL 病例外，其余患者均表达 CD19；因既往治疗中反复给予抗 CD20 抗体导致抗原减少或丢失，NHL 患者中 19.2%（10/52）CD20 PND 表达，所有 B-ALL 患者均不表达或部分表达 CD20；18.2%（2/11）ALL 患者和 13.5%（7/52）NHL 患者观察到 CD22 PND 表达。所有流式结果在几小时内（<4～6 小时）获得，显著快于 IHC 染色的时间（耗时数天）。 

综上，正确选择靶抗原是复发/难治 B 细胞恶性肿瘤有效 CAR-T 治疗的基础，尤其是对于既往接受过抗体或 CAR-T 治疗的患者。对于没有 BM 浸润或 SCE 标本的患者，我们通过组织流式细胞检测提供了快速、准确而有效的抗原鉴定，为其随后 CAR-T 治疗的靶点选择奠定了基础，并为肿瘤快速增长的患者赢得了治疗时间。

参考文献

https://ash.confex.com/ash/2020/webprogram/Paper139341.html

封面图来源：站酷海洛

编辑： 海往南    来源：北京博仁医院